酶聯(lián)生物小鼠1型膠原(COL1)ELISA試劑盒詳情介紹
常見問題以及解決方法:
1、試劑的選擇:選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的,但是在檢測之前還應(yīng)該提前半個小時將試劑拿到常溫下進行解凍
2、加樣中可能遇到的問題:在做血清或是血漿用于檢測試劑的時候,會碰到血清血漿不好分離的情況,這個時候的解決辦法是先放在常溫中1到2小時,然后在進行離心處理
3、洗板時容易造成誤差: 因為洗板是人工洗的,所以判斷什么時候洗干凈了也是人為判斷的,這個時候帶有主觀色彩,所以多清洗幾次,還有就是在洗的時候孔與孔之間的液體容易交叉流動
4、顯色問題: 使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時間太長,都有可能造成顯色劑不顯色。所以在進行顯色反應(yīng)的時候,要先查看顯色劑本身的情況
5、終止反應(yīng):在加終止劑的時候由于傾倒速度快,差生氣泡,造成假陽性結(jié)果。所以在倒終止劑的時候要緩慢倒
6、讀板:讀板的時候先應(yīng)該保證板的清潔干凈
7、嚴格按照說明書操作
實驗操作中注意事項總結(jié)如下
(1)要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA試劑盒測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
(3)血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應(yīng)在-70℃以下。
(4)冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。ELISA試劑盒標本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標本的混勻亦應(yīng)注意,不要進行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。
試劑盒內(nèi)酶標條可拆卸,按實驗需求可分多次使用;使用后的剩余試劑盒建議在首-次實驗后 1個月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時間以盒子上的標簽為準,保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。
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