ELISA試劑盒的好壞會直接影響ELISA實驗的結(jié)果,有的時候ELISA試劑盒會出現(xiàn)變質(zhì)的情況,那么,是什么原因造成ELISA試劑盒變質(zhì)呢?今天我們就來介紹一下ELISA試劑盒變質(zhì)的原因。
1、方法學(xué)的影響
ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的競爭等因素的影響,結(jié)果重復(fù)性較差,質(zhì)量較難控制。所以說,各種實驗方法在操作過程中可能會導(dǎo)致ELISA試劑盒變質(zhì)。
2、試劑因素
不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量一致,即使是通過批批檢驗的項目其檢測結(jié)果也存在差異,因此必須選擇和訂購長批號的試劑,并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性。對于效期短、使用率低的試劑,應(yīng)當(dāng)小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。
3、樣本因素
標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,前者包括類風(fēng)濕因子、補體、異嗜性抗體、自身抗體、等,后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細菌污染、標(biāo)本貯存時間過長、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。
4、操作因素
ELISA操作步驟復(fù)雜,操作不當(dāng)將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。這些步驟在操作過程中,操作不當(dāng)或者操作時間過長都有可能造成ELISA試劑盒的變質(zhì)。
5、常表示結(jié)果的常用方法
⑴.定性測定。
⑵.半定量測定 結(jié)果一般以滴度表示。
⑶.定量測定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進行ELISA測定,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
ELISA實驗過程復(fù)雜,影響因素較多,而ELISA試劑盒的有效性是ELISA實驗?zāi)軌蝽樌M行的前提,因此在實驗過程中要細心操作,安全保存各種試劑,加大復(fù)查力度,確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確。
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以上是介紹ELISA試劑盒變質(zhì)的原因有哪些?