做細(xì)胞生物學(xué)試驗(yàn),細(xì)胞鋪板大概是常見的一個試驗(yàn)。但是有很多人不是很得辦法,鋪得不是很均勻:要么中心密周圍稀,要么周圍密中心禿頂。怎么辦呢?以下來自技能人員詳細(xì)解析,請收好了!
一般96孔板,每孔是加100微升細(xì)胞懸液,從孔的左邊靠近底部加入,加完半邊板后,將未加的細(xì)胞懸液混一下再繼續(xù)加剩下的半邊板子,都加完后蓋上蓋子,左手悄悄扶住板的左邊,右手悄悄敲擊板的右邊緣,留意掌握力度(我一般輕巧敲三下),太強(qiáng)或次數(shù)太多會導(dǎo)致細(xì)胞會集成堆,將板順時針旋轉(zhuǎn)(逆時針作用不好),順次敲擊剩下三個邊,靜置約5分鐘,放入37度培育箱。
6孔板、12孔板或24孔板,均可采用將個孔加入少量無血清培育基,晃動滋潤整個孔底,然后用移液槍吸至第二孔,同樣辦法滋潤孔底,其它孔一次類推,這樣整個孔底都是濕潤的,細(xì)胞懸液會平鋪在整個孔底,加細(xì)胞懸液的時候能夠防止加在中心,中心細(xì)胞多,而加在周邊晃勻后會出現(xiàn)周邊細(xì)胞多中心少的現(xiàn)象,細(xì)胞渙散較均勻,留意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺靜置一下。
細(xì)胞懸液加完后,將細(xì)胞培育板舉高,對著燈光,從底部往上看,看細(xì)胞有沒有抱團(tuán)。然后從底部敲擊,使之渙散。假如試驗(yàn)室有平板振動器的話,建議用這個儀器稍振動一下,作用不錯,振幅小,頻率高。
細(xì)胞要盡量打散,大部分呈單個狀態(tài)。離心后,要充沛懸浮。還有轉(zhuǎn)移到六孔板后,需求晃動,晃的時候不要讓細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈,不然細(xì)胞就全被帶到中心去了,就會不均勻。
一瓶細(xì)胞長滿后,正常處理,在培育瓶里吹勻,然后鋪6孔板,每孔2毫升,鋪完之后不必調(diào)查直接用酒精棉擦拭,然后放到培育箱里,輕微的左右前后各三圈。基本上24小時之后再調(diào)查,每孔的細(xì)胞都會很均勻。
計(jì)算好所需求的悉數(shù)液體量和細(xì)胞量,混勻后,加到六孔板里,六孔板按橫8字型晃,顯微鏡下調(diào)查,假如不均勻,按上述辦法再晃。假如細(xì)胞未計(jì)數(shù)直接種的話,在種六孔板的過程中,隨時晃一下混勻用的瓶子。
放在水平板面上先上下移動,再左右移動,每個方向5到6次,但要害的是搖晃后直接放入培育箱中,不要再做過多的運(yùn)動,例如放到鏡下去看,不然很容易就又聚到中心去了。
以上呢,就是如何把細(xì)胞鋪板鋪均勻的辦法,以上技能文獻(xiàn)僅供參考,如您還有疑問您可來自咨詢我司技能專員,為您答疑解難!本司是一家出產(chǎn)和銷售科學(xué)用試劑產(chǎn)品,范疇包括化學(xué)、分析化學(xué)、生命科學(xué)和材料科學(xué)等根底創(chuàng)新范疇,助力客戶的研討方案,在廣大用戶的協(xié)助和支持下,經(jīng)過不懈的努力,以過硬的產(chǎn)品質(zhì)量和洽的服務(wù)態(tài)度,為客戶提供一個安穩(wěn)平臺,成為客戶可信賴的長期合作伙伴。