一、液體樣本
ELISA試劑盒液體樣本處理準(zhǔn)則:一切的液體樣本,用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),假如今后碰到其他的液體樣本,也按這個辦法,納入?yún)R總表。
1、血清:用無菌管搜集,室溫血液自然凝結(jié)10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細(xì)心搜集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉積,應(yīng)再次離心。
2、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細(xì)心搜集上清,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)該再次離心。
3、尿液:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細(xì)心搜集上清,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
4、胸腹水:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細(xì)心搜集上清,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
5、腦脊液:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細(xì)心搜集上清,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
6、唾液:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細(xì)心搜集上清,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
7、細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測排泄性的成份時,用無菌管搜集。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細(xì)心搜集上清,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
8、牛奶:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細(xì)心搜集上清,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
9、蜂蜜:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細(xì)心搜集上清,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
10、全血:用含有抗凝劑的無菌管搜集,當(dāng)即輕輕搖擺,來回輕輕倒置數(shù)次,使血液和抗凝劑混勻,以防血液凝結(jié)。
二、固體樣本
ELISA試劑盒固體樣本處理準(zhǔn)則:稱取1g的固體樣本,用9g的適宜緩沖液溶解,排泄蛋白可以直接離心取上清檢測,細(xì)胞內(nèi)的蛋白,要先搜集細(xì)胞,再用適宜辦法破碎,離心取上清測驗。
1、安排標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取1g安排,參加9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手藝或勻漿器將標(biāo)本勻漿充沛。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細(xì)心搜集上清。分裝一份待檢測,其他冷凍備用,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。關(guān)于植物安排,不好勻漿的話,就在液氮中充沛研磨;
2、細(xì)胞內(nèi)蛋白樣本
許多待測蛋白不是排泄蛋白,而是存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白,這個時候,要先搜集細(xì)胞,洗刷干凈,再破碎細(xì)胞,離心取上清。
(1)培養(yǎng)的細(xì)胞
A、動物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度到達(dá)100萬/ml左右。經(jīng)過重復(fù)凍融(假如重復(fù)凍融,破碎作用不好,就采用超聲波破碎),以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細(xì)心搜集上清,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
B、植物細(xì)胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,使細(xì)胞濃度到達(dá)100萬/ml左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設(shè)置破碎2s,冷卻30s的方法,充沛破碎細(xì)胞,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細(xì)心搜集上清,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
(2)安排的細(xì)胞
切割標(biāo)本后,稱取1g安排,參加9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手藝或勻漿器將標(biāo)本勻漿充沛。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗刷沉積的細(xì)胞三遍。再用上述的細(xì)胞破碎辦法破碎細(xì)胞。
3、土壤:稱取1g土壤,參加9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手藝將標(biāo)本充沛混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細(xì)心搜集上清。分裝一份待檢測,其他冷凍備用,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。假如是測排泄蛋白,直接取上清檢測,測驗細(xì)胞內(nèi)蛋白,要破碎細(xì)胞。
4、咽拭子:參加2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子頭部,搖勻,用鑷子取出咽拭子并擠干液體,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細(xì)心搜集上清。分裝一份待檢測,其他冷凍備用,保存過程中如有沉積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。假如是測排泄蛋白,直接取上清檢測,測驗細(xì)胞內(nèi)蛋白,要破碎細(xì)胞。
5.植物標(biāo)本中相關(guān)酶或蛋白的測定:(粗提?。?br />1、新鮮植物安排請在液氮中充沛研磨;
2、參加樣品體積9倍的提取液(pH?7.4?PBS緩沖液),3、?請于4度,8000rpm,離心30分鐘,取上清并暫時保存于4度待用。
三、ELISA試劑盒樣本搜集注意事項
1、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2、標(biāo)本收集后趕快進(jìn)行實(shí)驗,若不能馬上進(jìn)行實(shí)驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)防止重復(fù)凍融。
3、咱們羅列的是通用的樣本處理辦法,無法涵蓋各種樣本,關(guān)于一些特殊樣本,主張實(shí)驗人員多參閱已宣布的文獻(xiàn),自行設(shè)計合理的樣本處理辦法。